干貨 | qPCR 實驗中關于 CT 值問題的詳細攻略（中）

NTC（無模板陰性對照）出現擴增一般會有兩種情況：

（1）通過觀察融解曲線，NTC 與目的基因融解曲線峰形不重疊。一般 NTC 的 Tm 值較目的基因 Tm 值小。

這種情況下，NTC 的 C_T 值是由引物二聚體造成的，并不影響目的基因 C_T 值的采集。

（2）NTC 與目的基因融解曲線峰形重疊。NTC 的 Tm 值等于目的基因的 Tm 值。

這種情況下，說明體系已被氣溶膠污染了。那么，體系被污染，目的基因的 C_T 值還能正常使用嗎？

需要計算目的基因的 C_T 值與 NTC 的 C_T 值的差值（△C_T）來判定。

若 △C_T ≥ 5，說明氣溶膠帶來的污染對體系影響非常小，可以忽略不計。

如果達不到 △C_T ≥ 5 的程度，△C_T ≥ 3 也可以認為氣溶膠的污染程度很低，目的基因的 C_T 值可正常使用。

若 △C_T ＜ 3，說明污染已經很嚴重了，目的基因的 C_T 值是不能使用的。

未完待續...

轉自：諾唯贊