生物制品生產用動物細胞質量控制

前言

近年來，DNA 重組技術在醫藥領域的飛速發展，使得采用哺乳動物細胞表達系統的生物制品藥物逐漸成為主流，而對于此技術的主要原材料---細胞系和其他原料的檢定要求也日趨嚴格。

隨著質量源于設計（QbD）理念越來越廣泛的得到認可，意味著僅僅依靠檢測終產品來保證藥品質量是遠遠不夠的，這個理念和生物制品一直堅持的全過程質量控制的基本方針是基本一致的?；谶@一理念，把控生產用細胞的構建、鑒定，以及細胞庫的建立和管理，能夠從源頭上保證產品質量的穩定。

2015年版《中國藥典》三部“生物制品生產用動物細胞制備及檢定規程”中，對于生產用細胞基質的質量控制提出了要求。對于生產用細胞，需要建立細胞庫，細胞庫的建立可為生物制品的生產提供檢定合格，質量相同，能持續穩定傳代的細胞。在細胞庫建立之后，應至少對MCB和生產終末細胞進行一次全面檢定。當生產工藝發生改變時，還應重新對生產終末細胞進行全檢。細胞檢定主要包括以下幾個方面：細胞鑒別、外源因子和內源因子的檢查、成瘤性/致瘤性檢查等。細胞檢定的基本要求見下表：

細胞庫的檢定，對于保證細胞庫的質量和為后續工藝提供穩定的合格的細胞尤為必要，此部分的工作對生物制品產品而言非常重要。在進行項目選擇時，可參考《中國藥典》三部“生物制品生產用動物細胞制備及檢定規程”。

大多數生物制品產品是有活性的，無法采用傳統的終端滅菌工藝，因此在細胞庫建立和生產的各個階段都需要對無菌性進行檢定，其中分枝桿菌的檢查是2015年版藥典新增項目，檢定時應關注。

支原體的污染則是基礎研究和工業生產中的常見問題，據報道可能有高達87%的細胞系發生過支原體污染，支原體在光學顯微鏡下不可見，一般不引起培養物渾濁，因此支原體污染一般很難察覺，支原體檢測也十分必要。

感染性病毒顆粒污染生物制品和生物制品衍生產品是被廣泛關注的安全問題，對于細胞表達系統可能帶來的病毒污染問題世界各國均十分重視，ICH Q5A中規定了相應的技術要求（ICH關于“生物技術產品的病毒安全性評價”）。綜合以上因素對于病毒因子的檢查應該盡量充分全面。內外源病毒的檢定應充分考慮細胞的特性，傳代歷史，培養過程等因素。例如：

作為單克隆抗體等生物制劑最常用的生產用細胞系，中國倉鼠卵巢細胞(CHO)和小鼠NS0和Sp2/0等細胞系，由于其細胞來源的供體或細胞取材的原因，需要關注其特定種屬（鼠源）病毒的檢查。

對于細胞建庫過程中使用過動物來源的原料：如牛血清，或胰蛋白酶（豬），還需對特定的動物來源的病毒進行檢定。

另外，2015版《中國藥典》三部的主要變化還有，新增了“人用重組DNA蛋白制品總論”和“單克隆抗體類生物治療藥物總論”這兩個總論的制定為生物制品藥物的研發和質量控制提供了通用的指導原則。其中“人用重組DNA蛋白制品總論”對于連續培養的生產方式，要求應對收獲階段的微生物污染進行常規檢測；“單克隆抗體類生物治療藥物總論”則提出：細胞培養和收獲可采用限定細胞傳代，單次收獲產物的方式；也可采用限定細胞傳代時間，連續傳代多次收獲的方式。而對于兩種方式的收獲階段都有相關的規定，每次收獲后均應檢測抗體含量，細菌內毒素及支原體。對于限定細胞傳代次數的生產方式，需要采用適當的體外方法，對3次收獲物進行外源病毒的檢測。