細胞治療產品安全性—RCL檢測

      免疫細胞療法廣泛應用于臨床，尤其是惡性腫瘤，是指采集人體自身免疫細胞，經過體外改造、培養，使其數量擴增或增加其靶向殺傷能力，然后再回輸到患者體內，達到殺滅血液及組織中病原體、腫瘤細胞的目的。
     CAR-T細胞治療技術因其安全性和廣泛適用性，成為近年來一種發展較快的抗腫瘤治療技術，但實際應用中，以逆轉錄病毒或慢病毒為載體的CAR-T細胞治療產品，也仍然存在一定安全隱患，其主要原因在于，作為載體的逆轉錄病毒或慢病毒仍有可能產生具體有復制能力的病毒，即產生復制性逆轉錄病毒（replication competent retroviruses，RCR）或產生復制性慢病毒（replication competent lentivirus, RCL）。

逆轉錄病毒載體和慢病毒載體均為復制缺陷型載體，但在病毒載體生產過程中因穿梭載體、包裝載體及包裝細胞中的內源性逆轉錄元件之間，或病毒載體與免疫細胞的內源性逆轉錄元件之間發生同源或非同源重組，會導致可復制慢病毒(replication competent lentivirus，RCL)產生。鑒于RCL潛在的威脅，FDA及歐盟先后出臺了相關文件，要求在生產及應用的不同階段進行RCL的控制，包括生產病毒的細胞庫、終末細胞、病毒載體及轉導細胞，并對CAR-T細胞回輸后的患者個體進行監測。

珈創生物構建了HIV-1弱毒質粒，包裝了HIV-1弱毒作為RCL實驗的陽性對照病毒，并對陽性對照與抑制對照中HIV-1弱毒的添加量進行摸索，使用合適添加量，以驗證反應體系的適用性，又能監測反應靈敏度。同時，對供試品（慢病毒終末細胞、慢病毒上清液、CAR-T轉導細胞）添加量也進行實驗，以確保供試品不會明顯影響C8166敏感細胞的增殖和感染。供試品在C8166細胞中經過擴增階段和指示階段的培養后，感染終點的細胞上清將進行p24 Elisa檢測；同時細胞將用來提取DNA，進行psi-gag和VSV-G基因qPCR檢測（引物探針由本公司自行設計）。本公司建立的RCL檢測方法經過方法驗證，可滿足不同類型供試品的檢測需求。