如何正確培養這幾種細胞

細胞培養的過程大概是這樣的：失敗—成功—體味—收獲—思考—交流，你到了哪個階段？不妨和我們一起來看看養細胞的那些事。

一、昆蟲細胞培養體會

養了快一年的昆蟲細胞了， 而且最近又在做昆蟲血液的原代培養， 積累了點點經驗， 說出來大家共勉。

首先， 要廣泛閱讀細胞培養方面的專業書籍， 打造自己扎實的專業基礎， 為以后的操作做準備。 這方面的書有很多，「體外培養的原理與技術」， 薛慶善主編， 科學出版社；「細胞實驗指南」，D.L. 斯佩克特，ets 著， 黃培堂等譯；「細胞培養」， 司徒鎮強等。

其次， 每種細胞的培養條件都不相同， 別人的經驗和書本上的 protocal 都只能作為參考， 真正重要的是自己培養過程中的不斷摸索， 這就需要對自己培養過程中細胞出現的狀況作詳細記錄， 隨時總結。

再次， 培養要有極大的耐心， 過程中的影響因素又很多， 這又是細活， 其過程需要考慮各種影響因素， 當出現問題時一一加以排除， 找到最佳解決方案。 我在這里沒有討論細胞培養的細節問題， 因為那樣的話是說不完的。

二、纖維細胞培養經驗

曾經在自己制作的無細胞真皮上養過成纖維細胞， 無細胞真皮是按照文獻的方法制作的， 把成纖維細胞接種到無細胞真皮上的方法也是按書和文獻中的方法。 可是很奇怪， 成纖維細胞怎么都不長， 我重復了好多次， 結果都是失敗。

后來又做了對照， 同樣的條件， 一個平皿中直接接種成纖維細胞， 另一個平皿中放入無細胞真皮， 再接種成纖維細胞， 結果， 沒有無細胞真皮的平皿中細胞長得很好。

這樣說明不是細胞和平皿的問題， 那么問題在哪里呢？ 我苦思了很久， 覺得是不是無細胞真皮在處理的過程中用到了一些化學藥品， 對細胞的生長有害。

可是在接種細胞以前我已經按文獻上的方法將無細胞真皮用 DMEM 培養液浸泡了 48 小時， 在后來的實驗中我就將浸泡的時間延長， 并在中間每天換浸泡液一次， 經過 5 天的浸泡以后， 成纖維細胞的接種最終成功了。

這份遲到的成功提醒我， 對于書和文獻上的東西， 不能不信， 也不能全信， 很多東西還得靠自己在實驗中摸索。

三、懸浮細胞培養經驗

（１） 無菌操作是一切技術的基礎， 切記此條。

（２）在細胞狀態好時， 乘勝追擊， 準備好一切所需要的細胞原料。

實驗同時需要采用 FCM 檢測藥物干預后細胞周期的改變， 需要做 THC，Werstern Blot，RT－PCR 等時， 可以現將細胞處理好后， 根據不同的實驗步驟， 保存細胞標本， 然后各個擊破， 這樣可以減少實驗時間。

如要收集不同濃度點和時間點的標本， 細胞處理后， 部分用來做流式測周期 （固定那步可以放置 －２０ 度數日， 待標本收集全后一起檢測）。 部分用來細胞涂片 （固定后， 可以放 -20 度數月， 本人曾放置 3 月沒影響）。

部分用來做 Werstern Blot（將細胞離心呈粉末狀置 -80 度保存， 或者提取蛋白變性后保存， 粉末保存時間可達 2 月）。 部分用于提取 RNA 時， 可現加上 Trizol 混勻后， 置 -80 度保存。

原料準備好后， 在根據自己的時間進行合理安排， 多出時間查閱文獻。

（３）在進行每個實驗時， 一定要找到該實驗的詳細的 Protocal， 一步一步踏踏實實的完成， 一般都會得到比較理想的結果。

四、如何防止細胞污染

每個人都擔心細胞被污染， 每個人都有碰到自己的細胞被污染。

比較重要的幾點如下：

東西一定要用自己的。 既不要借別人的， 也不要借給別人。 可能大家覺得比較自私。 實際上還是很有好處的。 并不是每個人的操作都規范， 因此相互之間串著用， 很容易造成交叉污染。

我習慣口對口倒液體， 在倒前倒后都要在酒精燈上過一下。 自己認為比起用吸管吸更能很好的防止污染。 步驟越簡單， 越能防止污染， 而且還能節省很多吸管。

一次將所有的所需要試劑、工具放入工作臺。 不要做到半路， 又出工作間拿東西， 這樣增加了污染的機會。

整個操作要快、動作要輕、而且不要干其他的事情。

一般開紫外線照射臺的時候， 就將培養基、酶、DTHANKS 液拿到室外讓它自然升溫。 這樣 40 分鐘后， 溫度也升上來了。 有很多人將他放到 37 度水浴鍋里加熱。 一定要注意水浴鍋的衛生， 有的常年不清洗， 里面很臟， 容易在外面瓶身上吸附大量細菌。 因此用它的也一定要勤換水。 從水浴鍋拿出后， 最好找個毛巾插干上面的水。

操作前要洗手， 用 75%酒精搽手。用完操作臺， 要打掃衛生。

細胞要經常凍存， 一般只要細胞狀態好就將細胞凍存起來。 細胞狀態差了， 扔掉， 重新復蘇。 這是一個必須養成的習慣。

轉自丁香園上各位站友的小心得