Regulations and method validation requirements for rapid sterility test methods

發(fā)布時(shí)間：2023-09-20 15:58 信息來(lái)源：閱讀次數(shù)：次

無(wú)菌檢查法系用于檢查藥典要求無(wú)菌的藥品、生物制品、醫(yī)療器械、原料、輔料及其他品種是否無(wú)菌的一種方法。2020版中國(guó)藥典—《1101無(wú)菌檢查法》指出，無(wú)菌檢查包括薄膜過(guò)濾法和直接接種法，只要供試品性質(zhì)允許，應(yīng)采用薄膜過(guò)濾法。生物制品生產(chǎn)工藝、組成成分復(fù)雜，一般不能夠進(jìn)行終端滅菌，因此，對(duì)生物制品進(jìn)行嚴(yán)格的質(zhì)量控制，是降低制品中外源因子或有毒雜質(zhì)污染風(fēng)險(xiǎn)，保證生物制品安全有效的必要措施。

無(wú)菌檢查法實(shí)際包含3個(gè)部分的實(shí)驗(yàn)，分別為：培養(yǎng)基適用性檢查、方法適用性試驗(yàn)和供試品的無(wú)菌檢查。

培養(yǎng)基適用性檢查主要目的有兩個(gè)，一是確認(rèn)使用的培養(yǎng)基本身是無(wú)菌的，二是確認(rèn)使用的培養(yǎng)基細(xì)菌或真菌是可以生長(zhǎng)并且在規(guī)定時(shí)間內(nèi)可以被觀察到，即靈敏性檢查。方法適用性試驗(yàn)主要目的是判斷采用的方法，薄膜過(guò)濾法或者直接接種法，是否適用于要檢測(cè)的這種產(chǎn)品，方法適用性試驗(yàn)可以與供試品的無(wú)菌檢查同時(shí)進(jìn)行。藥典中從檢測(cè)數(shù)量、檢驗(yàn)量、陰/陽(yáng)性對(duì)照、接種要求、培養(yǎng)觀察和結(jié)果判讀全都進(jìn)行了細(xì)致規(guī)定。關(guān)于無(wú)菌檢查法，美國(guó)、日本、歐洲藥典等基本實(shí)現(xiàn)藥典協(xié)調(diào)，這里重點(diǎn)對(duì)比中美法規(guī)對(duì)于供試品的無(wú)菌檢測(cè)要求差異。

隨著新型生物制品的涌出，細(xì)胞制品的普及，無(wú)菌檢查提出了新要求。傳統(tǒng)培養(yǎng)方法因?yàn)橹辽傩枰?4天的培養(yǎng)時(shí)間才可以出結(jié)果，因此在時(shí)效性上無(wú)法滿足這些生物制品的放行檢需求，也包括原物料的質(zhì)檢需求。

關(guān)于無(wú)菌檢測(cè)替代方法的法規(guī)要求

laws and regulations

2020年版《中國(guó)藥典》第四部通則9201，藥品微生物檢驗(yàn)替代方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則提出，隨著微生物學(xué)的迅速發(fā)展，制藥領(lǐng)域不斷引入了一些新的微生物檢驗(yàn)技術(shù)，大體可分為三類(lèi)：

① 基于微生物生長(zhǎng)信息的檢驗(yàn)技術(shù)，如生物發(fā)光技術(shù)、電化學(xué)技術(shù)、比濁法等；

② 直接測(cè)定被測(cè)介質(zhì)中活微生物的檢驗(yàn)技術(shù)，如固相細(xì)胞計(jì)數(shù)法、流式細(xì)胞計(jì)數(shù)法等；

③ 基于微生物細(xì)胞所含有特定組成成分的分析技術(shù)，如脂肪酸測(cè)定技術(shù)、核酸擴(kuò)增技術(shù)、基因指紋分析技術(shù)等。

《CAR-T細(xì)胞治療產(chǎn)品質(zhì)量控制檢測(cè)研究及非臨床研究考慮要點(diǎn)》中提到，在可行的情況下，首選藥典方法用于無(wú)菌檢測(cè)，但考慮到Car-T細(xì)胞產(chǎn)品的特殊性，也鼓勵(lì)研究者開(kāi)發(fā)快速的無(wú)菌檢測(cè)法，但應(yīng)與藥典方法平行進(jìn)行，在獲得充分的比對(duì)數(shù)據(jù)后，結(jié)合無(wú)菌生產(chǎn)全過(guò)程的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估設(shè)計(jì)放行策略，才有可能替代藥典方法。

USP<1071>Rapid microbial tests for release of sterile short-life products a risk-based aproach介紹了有效期較短的無(wú)菌產(chǎn)品放行的快速微生物測(cè)試方法，包括ATP生物發(fā)光法、核酸擴(kuò)增法、流式等，并詳細(xì)闡述了這些替代方法的特點(diǎn)。

EP 2.6.21 Nucleic acid amplification techniques介紹了核酸擴(kuò)增法可作為替代方法，并詳細(xì)闡述了該方法作為替代法需驗(yàn)證的性能。

核酸qPCR方法適用范圍廣，具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、檢測(cè)時(shí)間短等特點(diǎn)，被廣泛應(yīng)用于基因工程藥物的相關(guān)檢驗(yàn)中。武漢珈創(chuàng)生物通過(guò)對(duì)樣本處理方法和相關(guān)的qPCR檢測(cè)方法進(jìn)行充分驗(yàn)證，獨(dú)立開(kāi)發(fā)了基于熒光探針qPCR方法的細(xì)菌/真菌快速檢測(cè)方法，經(jīng)驗(yàn)證，該試劑盒與藥典方法具有可比性。

武漢珈創(chuàng)生物—細(xì)菌/真菌快速檢測(cè)試劑盒

CANVEST qPCR Detection Kit

CANVEST® 細(xì)菌 qPCR 檢測(cè)試劑盒采用熒光探針 qPCR 技術(shù)，用于定性檢測(cè)細(xì)胞、細(xì)胞及基因治療產(chǎn)品以及其他生物制品中是否有細(xì)菌的污染。

本試劑盒中的引物探針可以對(duì)多種細(xì)菌（覆蓋200種以上常見(jiàn)病原菌）進(jìn)行特異性檢測(cè)，與真菌、支原體、昆蟲(chóng)、人類(lèi)及動(dòng)物細(xì)胞（豬源細(xì)胞除外）不存在交叉反應(yīng)。本試劑盒參照中國(guó)藥典 qPCR 方法檢測(cè)相關(guān)要求進(jìn)行驗(yàn)證，檢測(cè)限為100 CFU/mL。試劑盒中加入了內(nèi)部控制系統(tǒng)，內(nèi)部控制對(duì)照（IC）可在 PCR 擴(kuò)增反應(yīng)階段加入，以判斷待檢樣本對(duì)擴(kuò)增反應(yīng)是否存在抑制；也可在樣本提取階段加入，作為實(shí)驗(yàn)整體對(duì)照，同時(shí)監(jiān)測(cè)提取得率以及樣本中可能存在的 PCR 抑制情況。操作步驟簡(jiǎn)單，可批量操作。

CANVEST® 真菌 qPCR 檢測(cè)試劑盒主要適用于效期短、批量小，無(wú)法保證在產(chǎn)品使用前完成放行檢查的細(xì)胞類(lèi)制品，也可用于檢測(cè)主細(xì)胞庫(kù)、工作細(xì)胞庫(kù)、病毒種子批是否有常見(jiàn)病原性真菌的污染。

本試劑盒中的引物探針可以對(duì)多種致病性真菌進(jìn)行特異性檢測(cè)，與原核基因組、人等哺乳類(lèi)動(dòng)物基因組不存在交叉反應(yīng)，其核酸檢測(cè)限為 1-5genome copies/reaction，同時(shí)參照《中國(guó)藥典》(ChP 9201)、《歐洲藥典》（EP 5.1.6）和《美國(guó)藥典》(UPS 1223) ，從專(zhuān)屬性、檢測(cè)性、等效性、重現(xiàn)性和耐用性等 5 個(gè)方面進(jìn)行了全面的驗(yàn)證。操作簡(jiǎn)單快捷，樣本丟失率低，還可降低試劑和操作過(guò)程中存在的污染風(fēng)險(xiǎn)

快速微生物檢測(cè)的相關(guān)法規(guī)

laws and regulations

美國(guó)藥典-USP<1071>RAPID MICROBIAL TESTS FOR RELEASE OF STERILE SHORT-LIFE PRODUCTS A RISK-BASED APPROACH(無(wú)菌短貨架期產(chǎn)品放行的快速微生物檢查法: 依據(jù)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的方法)
美國(guó)藥典-USP<1223>VALIDATION OF ALTERNATIVE MICROBIOLOGICAL METHODS(微生物替代方法驗(yàn)證）
PDA TR33（中英文）-2013 可選擇的和快速的微生物檢測(cè)方法的評(píng)價(jià)驗(yàn)證與執(zhí)行
美國(guó)藥典-USP [71] STERILITY TESTS無(wú)菌檢查
中國(guó)藥典—1101無(wú)菌檢查法
中國(guó)藥典—9201藥品微生物檢驗(yàn)替代方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則
歐洲藥典EP.2.6.27 Microbiological Examination of Cell-based preparations (9.2)
CAR-T 細(xì)胞治療產(chǎn)品質(zhì)量控制檢測(cè)研究及非臨床研究考慮要點(diǎn)
細(xì)胞類(lèi)制品微生物檢查法草案擬公示稿

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Regulations and method validation requirements for rapid sterility test methods